Анализ соматических проявлений гибридного дисгенеза у Drosophila melanogaster (на модели признака cubitus interruptus Dominant)

Министерство образования и науки Украины

Харьковский национальный университет имени В.Н. Каразина

Кафедра генетики и цитологии


КУРСОВАЯ РАБОТА

на тему: Анализ соматических проявлений гибридного дисгенеза у Drosophila melanogaster (на модели признака cubitus interruptus Dominant)


Студентки 4 курса группы БГ-42

направление подготовки биология

Костоглодовой Анжелы

Руководитель: доцент

кафедры генетики и цитологии, к.б.н.

Волкова Н.Е.


г. Харьков

год


РЕФЕРАТ


Работа изложена на 48 страницах компьютерного текста, содержит 6 рисунков и 47 источников литературы.

Ключевые слова: дрозофила, мобильные элементы генома, гибридный дисгенез, соматические проявления гибридного дисгенеза, признак ciD, ген ciD, экспрессивность.

В ходе выполнения работы экспериментально установлена изменчивость экспрессивности признака cubitus interruptus Dominant Drosophila melanogaster при индукции синдрома гибридного дисгенеза. Установлено, что система гибридного дисгенеза в соматических клетках характеризуется следующим эффектом. У гибридов ciDC-S x Пирятин, наблюдается разнонаправленный эффект. Так при снижении уровня атрофии гонад наблюдается увеличение экспрессивности признака ciD.. В эксперименте также был обнаружен и однонаправленный эффект. У гибридов ciDC-S x W-10 наблюдается уменьшение процента атрофии гонад и при этом снижается экспрессивность признака ciD.

гибридный дисгенез атрофия гонада


СОДЕРЖАНИЕ


Введение

. Обзор литературы

.1 Мобильные элементы D.melanogaster как индукторы гибридного дисгенеза

.2 Явление и значение атрофии гонад, как признака гибридного дисгенеза

.3 Соматические проявления гибридного дисгенеза и механизмы их формирования

.4 Связь экспрессивности признака cubitus interruptus Dominant с экспрессией гена ciD

. Материалы и методы исследования

.1 Модельный объект

.2 Материал исследования

.3 Методы исследования

.3.1 Схема эксперимента

.3.2 Тест на атрофию гонад

.3.3 Методика оценки экспрессивности признака cubitus interruptus Dominant

.3.4. Методы статистического анализа

. Охрана труда

.Результаты и обсуждения

Выводы

Список литературы


ВВЕДЕНИЕ


Мобильные генетические элементы (МГЭ) являются составной частью всех изученных геномов как про- так и эукариотических организмов [21]. Не смотря на то, что МГЭ широко распространены в геномах разных видов, большинство экспериментально доказанных представлений о механизмах их активности и контроля перемещений связаны с исследованиями на дрозофиле [2]. Так, мобильные генетические элементы представляют собой дискретные сегменты ДНК, которые могут перемещаться из одного местоположения в другое внутри хромосом или между ними. Геном Drosophila melanogaster содержит около 50-ти различных семейств мобильных генетических элементов, которые вместе составляют 10-15 % ДНК этого вида. Число копий элементов отдельных семейств варьирует от нескольких до сотни, и при активации они могут оказывать значительное влияние на функционирование генома и на генетическую изменчивость [31].

МГЭ имеют несколько механизмов перемещения и могут выполнять разные функции, в связи с чем, активация различных семейств мобильных элементов может иметь как отрицательные, так и положительные последствия для генома хозяина [29].

Выяснение механизмов действия МГЭ на геном эукариот является в настоящее время одной из наиболее актуальных проблем современной генетики. Показано, что транспозиционная активность МГЭ является основным источником мутагенеза и что существенную роль в регуляции мутабильности в природных популяциях дрозофил играет семейство Р- и hobo- транспозонов, активность которых максимальна в условиях Р-М и Н-Е системах гибридного дисгенеза соответственно [39]. Широкое географическое распространение этих транспозонов и их причастность к вспышкам частот мутаций значительно усилило интерес к изучению популяций, имеющих Р- и hobo-цитотип. Тем более что аналогичные генетические структуры обнаружены и у других высших организмов, в том числе и у млекопитающих [25].

К настоящему времени накоплены следующие данные. Большая часть генных мутаций у дрозофилы - это результат инсерций МГЭ. Инсерции МГЭ могут изменять активность генов, так как в своей структуре содержат мотивы систем управления (регуляторные элементы генов) и энхансеры, состоящие из нескольких модулей, и поэтому они обладают способностью связываться с различными регуляторными белками, активирующими процесс транскрипции. Такая способность мобильных элементов изменять (понижать или повышать) уровень активности близлежащих генов оказалась достаточно неожиданной [40]. Изучение первичной последовательности МГЭ выявило, что в их структуре есть большое количество регуляторных сайтов и сигнальных последовательностей. Это значит, что МГЭ могут очень интенсивно воздействовать на работу гена, не разрушая сам ген. В результате кроссинговера между МГЭ могут возникать хромосомные перестройки различных типов: инверсии, дупликации и делеции. МГЭ могут достраивать теломерные концы хромосом. МГЭ могут участвовать в горизонтальном переносе генов. МГЭ могут откликаться «вспышкой транспозиций» при различных стрессовых воздействиях на геном. Такие МГЭ, как Р- и hobo-транспозоны (и некоторые другие) обладают способностью вызывать синдром гибридного дисгенеза, что проявляется у потомства в виде повышенной частоты генных мутаций, хромосомных аберраций и нерасхождения хромосом, явления рекомбинации у самцов, а также стерильности гибридов [34].

Перемещения МГЭ у дрозофилы происходят преимущественно в клетках зародышевого пути. Попытки выявить активность МГЭ в клетках соматических тканей долгое время не были успешными, и сохранялось представление о том, что перемещения МЭ у дрозофилы ограничены половыми клетками [3]. Большая часть таких работ была проведена с использованием генетических методов и моделей на линиях Drosophila melanogaster при Р-М-гибридном дисгенезе. Молекулярными методами было подтверждено, что перемещения Р-элемента в клетках соматических тканей заблокированы за счет особенностей сплайсинга [22]. Для hobo-элемента так же предполагается тканеспецифичная регуляция продукции транспозазы, но на уровне транскрипции [28]. В ряде работ описаны случаи перемещения ретротранспозонов в соматических тканях у высших организмов [26]. Что касается транспозонов, до сих пор сохраняется неясность в вопросе о возможности их перемещения в соматических клетках у Drosophila melanogaster. Выявление возможности и изучение особенностей транспозиций МГЭ в соматических клетках имеет большое значение, поскольку в ряде работ описан повреждающий эффект соматических перемещений Р-элемента [34]. Одной из важных причин повышенного интереса к соматическим эффектам активного перемещения МГЭ является потенциальная угроза малигнизации клеток при соматическом мутагенезе.

Цель работы: установить изменяется ли экспрессивность признака cubitus interruptus Dominant Drosophila melanogaster при индукции синдрома гибридного дисгенеза.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

Провести поиск и анализ литературы по теме исследования.

Освоить лабораторные методы работы с дрозофилой.

Поставить скрещивания самок линии ciDC-S D. melanogaster с самцами из линий, содержащих Р- или hobo-элемент, для индукции синдрома гибридного дисгенеза.

Проанализировать изменчивость проявления признака cubitus interruptus Dominant у особей с гибридным дисгенезом и без, потомков одних родителей.


. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ


.1 Мобильные элементы D. melanogaster как индукторы гибридного дисгенеза


МГЭ D. melanogaster по разным оценкам занимают от 15 до 22% всего генома. Это относительно небольшая часть по сравнению с высшими растениями, эндосимбиотическими бактериями и даже человеком. Каминкер в своей работе 2002 года, проанализировав геномную последовательность дрозофилы, установил наличие в ней 85 известных и 8 новых семейств МГЭ, которые встречались в количестве от 1 до 146 копий на геном. Идентифицировано 1572 полноразмерных и неполноразмерных МГЭ, что составляет 3,86% всей проанализированной последовательности эухроматина. Более чем две трети найденных элементов оказались неполноразмерными. В центромерных районах хромосом плотность МГЭ в 4,7 раз больше, чем в других районах. МГЭ дрозофилы предпочитают встраиваться в межгенные пространства, и часто располагаются в пределах другого МГЭ того же или иного класса и эти оценки не окончательны [40].

Сегодня МГЭ (их активация) считаются одним из основных факторов эволюционного процесса. Известно, что активное перемещение МГЭ индуцируется тепловым шоком. Система ответа на тепловой шок активируется не только повышением температуры, но и воздействием других весьма разнообразных внешних факторов: вирусным заражением клеток, обработкой ядами, детергентами, другими химическими факторами, нарушением энергетического обмена клеток и т.д. Все эти воздействия являются стрессовыми, неблагоприятными, а реакция системы теплового шока - генерализованной [39]. Кроме того, уровень транскрипции и транспозиций некоторых МГЭ индуцируются гамма-облучением, а также в определенных скрещиваниях, вызывая сложный набор изменений, который принято называть гибридным дисгенезом (редукция гонад, повышение частоты мутаций и модификаций, наличие рекомбинации у самцов) [31].

МГЭ подразделяют на три класса: ретротранспозоны, транспозоны и MITEs (III). Ретротранспозоны с помощью обратной транскриптазы (ревертазы) осуществляют синтез нити ДНК на РНК-матрице. Такие МГЭ составляют примерно 2% генома дрозофилы. Ретротранспозоны по своей структуре неоднородны. Ретротранспозоны 1-го класса характеризуются рядом следующих свойств:

. Дисперсная локализация в геноме.

. Специфическая копийность от 4-8 копий на геном (например, gypsy) до 200 копий у Dm225.

. Харакртерный для каждого МГЭ размер (от 5 до 85 kb).

. Встраивание в хромосомы хозяина в форме провируса.

. Наличие в структуре длинных концевых повторов (LTR).

. Наличие двух открытых рамок считывания (ORF): gag-, которые имеют гомологию с геном gag ретровируса, кодирующего 3 белковых компонента нуклеотидной сердцевины вириона, и pol-, напоминающий вирусный ген pol, кодирующий белки, необходимые для транспозиции (протеаза, Pr, обратная транскриптаза, RT, РНК-аза Н, интеграза, Int). У некоторых МГЭ имеется 3-я рамка считывания, env, сходная с геном env, кодирующим гликопротеиновую оболочку вируса.

Ретротранспозоны класса 2 не имеют концевых повторов, содержат 2 открытые рамки считывания: первая, gag-подобный мотив, и вторая, эндонуклеазный домен, кодирует обратную транскриптазу и РНКазу H. Следствием дисперсной локализации МГЭ в геноме и их способности к траспозициям является высокий уровень их полиморфизма как по количеству общих сайтов (мест) внедрения в хромосомы, так и по числу стабильных мест посадки, характерных для каждой популяции и линии [23].

В отличие от ретротранспозонов, передвижение которых имеет в своём алгоритме синтез РНК из ДНК с последующим обратным ДНК из молекулы РНК, то есть метод «копировать и вставить», транспозоны передвигаются по геному способом «вырезать и вставить». Это осуществляется благодаря комплексу ферментов транспозазы. Информация об аминокислотной последовательности белка транспозазы закодирована в последовательности транспозона. Кроме того, этот участок ДНК может содержать другие, связанные с транспозоном последовательности, например гены или их части. Большинство ДНК-транспозонов имеют неполную последовательность. Такие транспозоны не являются автономными и передвигаются по геному благодаря транспозазе, которая закодирована другим, полным, ДНК-транспозоном. Транспозаза способна делать двухцепочные разрезы ДНК, вырезать и вставлять в ДНК-мишень транспозон [34].

Естественно, что после открытия нового класса генетических объектов, в частности, у дрозофилы, возник вопрос об их роли в геноме. Первоначально МГЭ считались «геномными паразитами», которые способны к самостоятельным автономным перемещениям в геноме, наследоваться вместе с другими генами генома и быть причиной инерционного мутагенеза [3]. До некоторого времени представление о МГЭ как об «эгоистической ДНК» оставалось доминирующим. Однако постепенно накапливались факты, свидетельствующие о том, что МГЭ выполняют в геноме определенные функции [19]. Так, МГЭ содержат разнообразные функциональные сайты знаки пунктуации и управления (промоторы, терминаторы, операторы, репликаторы, энхансеры, регуляторные сайты теплового шока [25], которые существенны для окружающих участков генома. Инсерции МГЭ в кодирующие зоны генов приводят к нарушению или резкому изменению их функций. Это связано с прямым нарушением генов и с влиянием знаков пунктуации (промоторов, терминаторов и др.) на процессы считывания. Доля таких мутаций особенно велика у прокариот, которые имеют высокую плотность кодирования информации в геноме [29]. Инсерции МГЭ в некодирующие области (спейсеры, интроны, фланговые участки др.) приводят к более "мягким" последствиям: усилению или ослаблению активности близлежащих генов, изменению их регуляции и т.п. Такие последствия преобладают у высших эукариот, у которых кодирующая часть генома составляет ~3-5%. Показано также, что среди видимых мутаций у дрозофилы и других объектов наиболее значительную долю составляют не замены нуклеотидов, а именно инсерции МГЭ [23].

В ряде своих работ Б. Мак-Клинток в 1984 г. продемонстрировала индукцию транспозиций ретротранспозонов у дрозофилы при помощи стрессовых температурных воздействий. В ранних работах Мак-Клинток было обнаружено, что условием вспышки транспозиций являются присутствие и определенное аллельное состояние второго регуляторного элемента [21]. Энгельс в 1989 г. показал, что транспозиции P-элемента дрозофилы индуцируются при определенном (дисгенном) скрещивании линий дрозофил, имеющих разный цитотип, но только в варианте ? M-цитотип × ? Р-цитотип. В ряде работ было показано, что индуцирующими факторами транспозиций МГЭ могут быть такие генетические процессы, как инбридинг, аутбридинг и изогенизация. Кроме того, в многочисленных селекционных экспериментах был продемонстрирован сопряженный ответ на отбор количественных признаков и рисунков локализации мобильных элементов [34].

Рассмотрим подробнее механизм индукции синдрома гибридного дисгенеза такими МГЭ, как Р- и hobo- транспозоны дрозофилы.

Р-элемент. Одним из первых исследованных и наиболее изученных у дрозофилы является мобильный Р элемент. Его размеры могут варьировать от 0,5 до 2,9 т.п.н. Различные линии мух обычно несут 50-60 копий этого элемента, и треть этих копий является полноразмерными. Для перемещения элемента in vivo необходимо наличие определённой последовательности длиной 150 п.н. на каждом конце транспозона. Встраивание этого элемента приводит к возникновению дупликации в 8 п.н. в участке ДНК, где он встраивается. Полноразмерный элемент имеет 4 открытых рамки считывания, или 4 экзона. В зародышевых клетках транскрипт включает все эти последовательности и продукт, считываемый с этой матрицы, является транспозазой, белком, который обеспечивает перемещение транспозона. В соматических клетках в белковом продукте последовательность 3-го интрона не представлена и этот белок является репрессором I типа. Тогда как белки, синтез которых обеспечивается неполноразмерными копиями Р элемента, называются репрессорами II типа [35].

Линии, не содержащие Р элемент называют линиями с М цитотипом. Линии, содержащие Р элемент, но не характеризующиеся в системе дисгенных скрещиваний достаточно высоким уровнем редукции гонад называют линиями с Q цитотипом. Линии же с наличием Р элемента и характеризующиеся уровнем редукции гонад от 10 до 100 % называют линиями с Р цитотипом. Выделяют также линии М цитотипа, которые имеют некоторое количество копий Р элемента, но в дисгенных скрещиваниях ведущие себя как М линии [22].

Линии D. melanogaster, собранные в природе до 1950 года (Америка) и до 1960 года в других популяциях мира и далее содержащиеся в лабораториях, как правило, не содержат Р элемента и, соответственно, характеризуются М цитотипом. Считается, что D. melanogaster была инфицирована этим МГЭ в средине прошлого столетия и этот элемент происходит из генома Drosophila willinstoni, обитавшей на Карибах и в Юго-восточной части Северной Америки. В последующие десятилетия этот мобильный элемент очень быстро распространился в популяциях D. melanogaster всего мира. Считается, что сегодня в мире не существует природных популяций D. melanogaster, геном которых был бы свободен от этого мобильного элемента [3].элемент. Транспозон hobo - ещё один мобильный элемент, способный вызывать синдром гибридного дисгенеза у дрозофилы и успешно колонизирующий представителей этого вида. Он принадлежит к суперсемейству мобильных элементов hAT [28]. Полноразмерная копия этого элемента состоит из около 3 т.п.н., включая инвертированные терминальные повторы в 12 п.н. Встраивание элемента hobo в сайт мишень приводит к образованию дупликаций в 8 п.н. Полноразмерный элемент имеет 2 открытых рамки считывания, одна из которых кодирует транспозазу, состоящую из 658 аминокислотных остатков, статус второй, расположенной выше и состоящей из 32 кодонов, до сих пор не ясен. hobo транспозаза отвечает не только за перемещение элементов, которыми кодируется, но и за активацию МГЭ других классов, например Hermes. Канонический hobo элемент содержит три ТРЕ повтора (треонин (Т), пролин (Р), глутаминовая кислота (Е)), состоящих из 9 п.н. каждый и кодирующих вышеуказанную последовательность аминокислот. Полагают, что предковый элемент имел 10 таких повторов. Большинство природных популяций D. melanogaster являются мономорфными и содержат hobo элемент с тремя ТРЕ. Однако существуют и полиморфные популяции, содержащие различное количество ТРЕ, они обнаруживаются только в Северной Европе, Южной Африке и Экваториальной Африке [26].

В геноме дрозофилы элемент hobo представлен тремя различными формами: (1) полно- и неполноразмерными элементами; (2) элементами с внутренними делециями и (3) последовательностями, подобными элементу hobo - hRS (hobo-related sequences), которые считаются остатками реликтовых hobo элементов (тех, которые инвазировали группу предшественника группы melanogaster на раннем этапе). Считается, что перемещаться могут все эти последовательности, используя канонический hobo как источник транспозазы. Показано, что некоторые цис-регуляторные элементы hobo способны распознаваться транскрипционными факторами генов развития дрозофилы, что свидетельствует о возможности использования этих последовательностей в качестве материала в процессе эволюции [20].

Считается, что существует 2 класса линий в отношении hobo элемента. Это Н линии, которые содержат 3 т.п.н. полноразмерные элементы и многочисленные их производные меньшего размера. И второй класс - это Е линии, характеризуются отсутствием полноразмерных элементов, однако, имеют некоторое количество их фрагментов. Н линии обычно содержат от 2 до 10 полноразмерных копий hobo на геном, а дефектных элементов 30-75. Гибридный дисгенез наблюдается в реципрокных скрещиваниях Н и Е линий и характеризуется повышенной частотой возникновения мутаций, включая хромосомные перестройки, и редукцию гонад [31]. Структура, распространение в геноме и генетическое поведение этого МГЭ в общих чертах подобны системе Р элемента [28].

Таким образом, мобильные генетические элементы являются индукторами мутагенеза и модификаторами генной активности, а, следовательно, могут приводить к изменению фенотипического проявления (экспрессивности) различных признаков путём регуляции экспрессии кодирующих их генов [3].


.2 Явление и значение атрофии гонад, как признака гибридного дисгенеза


Активация мобильных элементов в системах гибридного дисгенеза вызывает, среди прочих нарушений, особый вид стерильности гибридов, которая обусловлена недоразвитием гонад [19]. Дисгенная стерильность по-разному проявляется в трех системах гибридного дисгенеза. P-M дисгенез [35] приводит к недоразвитию яичников у гибридных самок и семенников у самцов, в I-R системе [37], не происходит изменения морфологии гонад, но увеличивается количество дефектных яиц и частота гибели эмбрионов (SF-стерильность). Активация hobo элементов в H-E системе гибридного дисгенеза приводит как к недоразвитию гонад у самок и самцов первого поколения, так и к высокому уровню доминантных леталей среди отложенных яиц [28].

Стерильность является следствием потери зародышевых клеток на стадиях раннего эмбриогенеза и личинки. Для P-M гибридного дисгенеза гибель зародышевых клеток значительно усиливается при повышении температуры до 29 °С [22]. Атрофия гонад один из характерных и интенсивно изучаемых аспектов P-M и H-E систем гибридного дисгенеза. GD-стерильность является следствием вымирания клеток в примордиальной зародышевой линии возможно из-за хромосомных разрывов, опосредованных активностью P-элемента [21]. Однако ни кинетика гибели зародышевых клеток, ни число клеток, которые должны быть элиминированы для появления GD-стерильности не известно. Первые признаки стерильности появляются уже у 5-6 часовых эмбрионов. Максимальный уровень гибели клеток наблюдается на личиночной стадии развития, когда зародышевые клетки испытывают экспоненциальный рост, но некоторые умирающие клетки были обнаружены до деления клеток зародышевой линии [36].

Механизм гибели клеток может быть обусловлен разрывами хромосом, имеющими летальный эффект. Следствием этого является отсутствие половых клеток в яичниках и семенниках и общее недоразвитие их у взрослых гибридных самок и самцов. Гибриды могут быть полностью стерильны, если редуцированы обе железы и частично фертильны, если атрофирован один семенник или яичник [30]. Неатрофированные гонады у дисгенных гибридов часто отстают в своем развитии и содержат меньшее число яиц или сперматоцитов по сравнению с недисгенными особями [36].

Степень выраженности гонадной атрофии сильно зависит от температуры, при которой идет развитие гибридов. В отношении Р-М системы атрофия наиболее значительна при 29° С у самок и при 27° С у самцов, а при 24° С и ниже практически отсутствует [24]. Для Н-Е системы характерна наиболее сильная атрофия при 25°С и наименьшая при 29° С [27]. При более низких температурах АГ наблюдается в меньшей степени. Количество и размерность копий Р- и hobo-элементов так же сильно влияют на способность индуцировать гибридный дисгенез, в связи с чем, частота гонадной атрофии может изменяться от нескольких до ста процентов [32].

Сказать точно, в чем заключается адаптивное и /или эволюционное значение синдрома гибридного дисгенеза пока сложно. Предполагается, что атрофия гонад (одно из проявлений синдрома гибридного дисгенеза) является одним из механизмов реализации нескрещиваемости видов и особей из разных популяций и, следовательно, может быть компонентом механизмов видообразования. Примером являются популяции дрозофилы, которые скрещиваясь на границе ареалов дают стерильное потомство. Это объясняется тем, что МГЭ, локализированные в геноме особей данной популяции, обладающей, скажем, Р- или Н-цитотипом, при скрещивании с особями другой популяции (с противоположным цитотипом) дают стерильное потомство[34].

В то же время существует и другая, противоположная эволюционная функция МГЭ, которая несёт адаптивное значение для организма. Известно, что при попадании организма в стрессовые условия, начинается активная транспозиция МГЭ в геноме. В результате перемещений и встраивания в геномные последовательности, изменяется активность генов, синтезируемые ими продукты, что влечет за собой каскад реакций, которые непосредственно влияют на дальнейшее функционирование клеток, органов и организма в целом. Эти изменения могут быть разнонаправлены, повышать или снижать адаптивные возможности индивида, но при этом основной их задачей является увеличение разнообразия особей в популяции. Наиболее приспособленные к сложившимся стрессовым условиям особи будут иметь шанс выжить и размножиться [29].


.3 Соматические проявления гибридного дисгенеза и механизмы их формирования


МГЭ имеют определенную структурную организацию, благодаря которой могут перемещаться в геноме как в пределах одной хромосомы, так и между хромосомами различных клеток и тканей. Как уже было сказано, МГЭ имеют способность увеличивать число копий в геноме хозяина, вызывать мутации в соматических и генеративных тканях, встраиваясь в гены или окрестности генов, служить причиной хромосомных перестроек, влиять на фертильность особей и даже приводить организм к гибели [31]. Возникающие мутации могут не сказываться на жизнеспособности организма, если они возникли в гене, который отвечает, например, за формирование фенотипического признака [19].

Транспозиции МГЭ, способных вызывать синдром гибридного дисгенеза, как было показано в работах некоторых авторов, приводят не только к атрофии гонад, но и к различным мутациям в соматических тканях. В редких случаях мутационные изменения могут иметь адаптивное значение и особи с такими мутациями получают преимущество перед другими сородичами для выживания и оставления потомства. Однако, чаще всего, мутации вредны для организма и приводят к стерильности или гибели особи. Перемещения МГЭ при гибридном дисгенезе у дрозофилы происходят преимущественно в клетках зародышевого пути. Причина различной активности МГЭ в клетках соматических и генеративных тканей подробно изучена у Р-элемента и заключается в особенностях тканеспецифичного сплайсинга транспозазной пре-м-РНК. Однако в ряде работ были описаны случаи перемещения ретротранспозонов в соматических клетках у высших организмов [38].

Что касается транспозонов, существуют единичные данные, прямо или косвенно свидетельствующие о соматической активности этих элементов. Так, например, Коваленко Л.В. в своей работе на тему hobo-элемент как фактор нестабильности генома D. melanogaster в клетках генеративных и соматических тканей получила такие результаты: hobo-элемент способен проявлять транспозиционную активность в клетках соматических тканей. Во-первых, выявлена взаимосвязь между присутствием в геноме активного hobo-элемента и повышением частоты рекомбинаций на клетках крыла Drosophila melanogaster. Во-вторых, с помощью метода FISH, продемонстрировано перемещение hobo-элемента в клетках соматических тканей у Drosophila melanogaster и получена оценка частоты hobo-транспозиций - 3,5x10-2 на сайт, на Х-хромосому [29].

Активность мобильных элементов в P-M и H-E системах гибридного дисгенеза обусловливает мутабильность некоторых нестабильных локусов. В P-M системе наибольшую известность получил локус singed-weak [35], в H-E системе локус vgal [26] и сконструированный маркерный элемент h(w+). Аллель snw обусловлена инсерцией двух дефектных P-элементов и делеция одного или другого из этих элементов в присутствии транспозазы полноразмерных элементов приводит к появлению соответствующих производных аллелей sne и sn(+). Повышенная мутабильность локуса vgal обусловлена активацией дефектных копий hobo в присутствии активных элементов этого семейства. Генетически сконструированный маркерный элемент h(w+) представляет hobo-элемент со встроенным геном mini-white, который определяет оранжевую окраску глаз [23]. Маркерная white линия несет в X-хромосоме два сконструированных элемента h(w+). Это обусловливает оранжевый фенотип цвета глаз, но при эксцизии одного из элементов цвет становится менее выраженным [31]. Линии с нестабильными аллелями широко используются при оценке активности P и hobo-элементов в дисгенных скрещиваниях, и частота мутирования этих аллелей служит дополнительным количественным критерием.

Таким образом, контроль активности мобильных генетических элементов в системах гибридного дисгенеза тесно взаимосвязан с механизмами транспозиций и репарации генетических повреждений. Это обусловливает чувствительность гибридного дисгенеза к действию внешних факторов и его модификацию различным генетическим фоном. Существующие предпосылки позволяют рассматривать синдром гибридного дисгенеза не только как показатель активности некоторых семейств мобильных генетических элементов, но и как целостную генетическую систему, обеспечивающую контроль генетической изменчивости генотипа в неблагоприятных условиях [29].

В целом же, вопрос об активности транспозонов в соматических клетках D. melanogaster остается открытым. Выявление возможности и изучение особенностей транспозиций МГЭ в соматических клетках имеет большое значение, поскольку в ряде работ описан повреждающий эффект соматических перемещений Р-элемента . Более того, соматические мутации представляют собой потенциальную угрозу малигнизации клеток [2].


.4 Связь экспрессивности признака cubitus interruptus Dominant с экспрессией гена ciD


In(4)ciD <#"363" src="doc_zip1.jpg" />

Рис. 1. Структура аллеля ciD <#"222" src="doc_zip2.jpg" /> Прерванная жилка крыла L4 Рваный край крыла Прерванная жилка крыла L4, L5 Прерванная жилка крыла L4, L5 Постериорный край крыла слит с алулой Скручивание крыла Нормальный фенотипРис. 2. Фенотип ciD <#"525" src="doc_zip7.jpg" />

Рис. 3. Взаимодействие ciD <#"justify">2.2 Материал исследования


В исследовании использовались 3 лабораторные линии D. melanogaster из коллекции кафедры генетики и цитологии Харьковского национального университета имени В.Н. Каразина: сiD C-S (мутация сubitus interruptus Dominant (сiD) на генетическом фоне Canton-S (C-S)), W-10, Пирятин.

сiD C-S - линия, в которой мутация сubitus interruptus Dominant была предварительно переведена на генетический фон линии дикого типа Canton-S путём последовательных насыщающих скрещиваний с отбором на маркерный фенотип.

сubitus interruptus Dominant (ciD): лабораторная линия. Линия характеризуется наличием гибридного гена ciD, образованного в результате инверсии. Данный ген способен вызывать видимую мутацию с летальным эффектом в гомозиготе. У гетерозигот мутация проявляется в виде прерванной жилки крыла L4, возможно появление эктопических жилок, слияние постериорного края крыла с алулой, часто наблюдается рваный край крыла. Кроме того, может отмечаться дистальный пробел в L5 [44].Special (C-S): лабораторная линия, полученная из природной популяции долины Кантон, штат Огайо, США. Отселектирована Бриджесом. Несёт рецессивную мутацию множественных торакальных и скутеллярных щетинок, которая частично перекрывает дикий тип, но проявляется спорадически в линиях, частично полученных из Canton-S. Хромосомы клеток слюнных желез нормальны. Поддерживается в коллекции с 1960-х годов [46].: лаборатрная линия дикого типа Harwich (содержит полноразмерный Р-элемент; Р-цитотип)

Пирятин: линия полученная от родителей, отловленных в природе в окресностях г. Пирятин. Предполагается наличие hobo-элемента [47]


.3. Методы исследования


.3.1 Схема эксперимента


КонтрольОпыт? Пирятин х ? Пирятин? сiDC-S x ? Пирятин? сiDC-S x ? сiDC-S? сiDC-S x ? W-10? W-10 x ? W-10

Мух скрещивали по 3 пары и содержали при температуре 23-24оС на стандартной сахарно-дрожжевой среде.


.3.2 Тест на атрофию гонад

Уровень стерильности проводили по тесту атрофии гонад особей первого поколения, полученных в скрещиваниях самок линии ciDC-S D.melanogaster с самцами из линий, содержащих Р- или hobo-элемент (Рис.4.), а также анализировали особей контрольных линий Пирятин и W-10. Скрещивали по 3 пары (in masse). Перед анализом морфологии яичников и семенников полученных гибридных особей содержат для созревания 2-3 дня при температуре 25оС. Подсчитывали особей с односторонней (А1) и двусторонней атрофией (А0). Частоту атрофии гонад (АГ) вычисляли как %АГ=%А0 + 1/2% А1[30].

Мух вскрывали под бинокуляром препаровальными иглами в воде.


а b с аb с

Рис. 4. Атрофия гонад у самок (верхняя строка) и самцов (нижняя строка) дрозофилы: a - нормальные гонады; b - односторонняя атрофия гонад; с - двусторонняя атрофия гонад


.3.3. Методика оценки экспрессивности признака сiD

Экспрессивность количественного признака сiD оценивали по соотношению длины отсутствующего участка жилки к проекции её полной длины [43]. Измерение осуществляли на фотографиях имаго, выполненных с помощью стереоскопического микроскопа и цифровой камеры. Обработка фотографий производилась с помощью программного обеспечения ImageJ, а вычисления - Homacosoft XQR2. Результат выражался в долях.


.3.4 Методы статистического анализа

Частоту атрофии гонад (АГ) вычисляли как %АГ=%А0 + 1/2% А1 (Marin et al., 2000). Для всех вариантов эксперимента рассчитывали ошибку выборочной доли (Атраментова).

Сравнение выборочных долей проводили при помощи критерия Фишера.

Показатель экпрессивности усредняли в каждом варианте опыта. И для каждого среднего рассчитывали статистическую ошибку.

Сравнение экспрессивности в разных вариантах эксперимента проводили при помощи дисперсионного анализа количественных признаков [18].

Для вычислений использовали программное обеспечение Microsoft Excel и STATISTICA_8.0.550.


. ОХРАНА ТРУДА И БЕЗОПАСНОСТЬ В ЧРЕЗВЫЧАЙНЫХ СИТУАЦИЯХ


Охрана труда - это система правовых, социально-экономических, организационно-технических, санитарно-гигиенических и лечебно-профилактических мероприятий и средств, направленных на сохранение жизни, здоровья и трудоспособности человека в процессе трудовой деятельности [5]. Государственная политика в области охраны труда направлена на создание безопасных и здоровых условий труда, предотвращение несчастных случаев и профессиональных заболеваний.

Первостепенным ее принципом является приоритет жизни и здоровья работающих. Реализация принципов и задач охраны труда связана с научным прогнозированием возможных чрезвычайных ситуаций в производственном процессе и выполнение мероприятий, привлечение средств снижающих их уровень риска.

При выполнении научно-исследовательских работ в области генетики в роли потенциального источника опасности могут выступать исследуемые биологические объекты, методы работы с ними, а также результаты исследования. Перед началом выполнения работы со мной был проведен первичный инструктаж [6] по технике безопасности при работе в биологической (генетической) лаборатории. Суть данного инструктажа касалась изложения правил безопасного выполнения работ.

При выполнении данной курсовой работы биологическим объектом, на котором проводилось исследование, являлись различные линии (в том числе и сконструированные в лаборатории, но не генетически модифицированные согласно определению вида Drosophila melanogaster [9]. Данный вид не является напрямую опасным для человека, а также не является переносчиком возбудителей заболеваний человека. Он представляет собой всемирно признанный модельный генетический объект и не значится ни в одном из списков видов, представляющих реальную или потенциальную биологическую угрозу, в законодательной базе Украины [13, 14, 15]. Тем не менее, разведение данного объекта в лабораторных условиях связано с использованием химических реактивов, электроприборов и лабораторной посуды. При выполнении курсовой работы использование упомянутых оборудования и материалов осуществлялось в соответствии с типовыми и местными инструкциями по технике безопасности, разработанным службой охраны труда ХНУ имени В.Н. Каразина и утвержденными в надлежащем порядке [Инструкции по охране труда № 71, № 5; Инструкция о мероприятиях пожарной безопасности в служебных и конторских помещениях (офисах)], а также в соответствии с инструкциями, прилагающимися непосредственно к приборам и расходным материалам.

Так, при работе с данным биологическим объектом (для его наркотизации) используется диэтиловий эфир - химическое соединение, которое входит в список №2 (Прекурсоры, относительно которых устанавливаются контрольные мероприятия) Списка наркотических средств, психотропных веществ и прекурсоров [7]. Все виды работ, требующие использования данного соединения выполнялись под вытяжкой [8].

Поскольку источником электрической безопасности является электрический ток, основными источниками потенциальной опасности в ляаборатории могут стать - электроприборы (термостат, сухо-жаровой шкаф, электроплита, осветители к микроскопам), розетки, выключатели, ПК, поэтому разработаны соответствующие меры защиты согласно нормативным требованиям ГОСТ 14254-69, ГОСТ 14255-69, ПУЭ-87. В лаборатории для обеспечения работы электрооборудования применяется переменный ток, напряжением 220 В. По степени опасности поражения электрическим током данное помещение приравнивается к помещениям без повышенной опасности, согласно ПУЭ-87 [10].

Основными мерами защиты от поражения электрическим током являются:

обеспечение недоступности токопроводящих частей, которые находятся под напряжением, для случайного прикосновенья;

контроль и профилактика повреждений изоляции;

организация безопасной эксплуатации электроустановок.

Понятие пожарная безопасность означает состояние объекта, при котором исключается возможность пожара, а в случае ее возникновения предотвращается влияние на людей опасных факторов пожара и обеспечивается защита материальных ценностей.

В лаборатории используется электрооборудование, которое отвечает классу пожарной зоны помещения категории Д, степень огнестойкости III, степень защиты светильников не ниже ІР-2Х; категория защиты домов от молнии установлена ІІІ.

Согласно ГОСТ 12.1.004-91 [11] пожарная безопасность обеспечивается системой предотвращения пожара и пожарной защиты и проведением организационных мер. Помещение лаборатории оснащено углекислотным огнетушителем ВВК-1,4 и ведром с песком. Организационными мероприятиями по обеспечению пожарной безопасности является обучение работников кафедры правилам пожарной безопасности, разработка и реализация норм и правил пожарной безопасности, инструкций о порядке работы с пожароопасными материалами. Как профилактические меры по предупреждению причин пожаров используется постоянный контроль за состоянием электрической проводки и соединительных проводов. Обязательно наличие плана эвакуации. Ширина, высота и пропускная способность проходов и выходов отвечает противопожарным нормам.

Закон Украины об « Охране окружающей среды» был принят 25 июня 1991 года (редакции Закона происходили в 1993 г., 1996 г.) [12]. Закон определяет правовые, экономические, социальные основы охраны окружающей среды. Задача Закона состоит в регулировании отношений в области охраны природы, использовании и воспроизведении природных ресурсов, обеспечении и ликвидации последствий негативного влияния на окружающую среду хозяйственной и другой деятельности человека, сохранение природных ресурсов, генетического фонда наций, ландшафтов и других естественных объектов. Международные стандарты включают требования сниженного энергопотребления и ограничения допустимых уровней мощности, потребляемых в неактивном режиме. Необходимо выполнять требования стандарта ISO - 14004 [16], что определяет требования к организации производственного процесса с минимальным убытком, для окружающего природного среды.


. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ


. Анализ атрофии гонад

Анализ межполовых различий уровня атрофии гонад в линиях и у гибридов показал следующее (Рис.4). Линия Пирятин характеризуется высоким показателем АГ у самок, тогда как этот показатель у самцов данной линии - в пределах нормы, что по данным литературы составляет около 5 % [27]. В скрещивании ciDC-S x Пирятин уровень АГ у самцов не превышает допустимого значения для данного вида, тогда как самки отличаются незначительным увеличением этого показателя. Линия ciDC-S характеризуется достаточно высоким показателем АГ, как у самцов, так и самок. У потомков от скрещивания ciDC-S x W-10 выявлено, что уровень АГ самцов находится в пределах нормы, тогда как самки характеризуются сравнительно высокими значениями данного показателя. В линии W-10 более высокий уровень АГ установлен для самок и менее высокий - для самцов.


Рис. 4. Межполовые различия уровня атрофии гонад в линиях и у гибридов

При сравнении потомков от разных скрещиваний можно отметить, что самки в скрещивании ciDC-S x Пирятин характеризуются сниженным уровнем АГ по сравнению с контролем (линия Пирятин), то же самое наблюдается и с самцами, хотя в случае самцов снижение незначительно. Скрещивание ciDC-S x W-10 показало, что по сравнению с контролем (линия W-10) уровень АГ самцов снизился до уровня нормы. Этот показатель у самок тоже снизился, но незначительно и в целом остался на высоком уровне. При сравнении со вторым (линия ciDC-S) потомство от скрещивания ciD C-S x Пирятин характеризуется снижением уровня АГ как у самцов, так и у самок. В скрещивании ciDC-S x W-10 наблюдается незначительное уменьшение уровня АГ у самок, и резкое снижение (до уровня нормы) показателя у самцов.

Экспрессивность признака ciD

Анализ экспрессивности признака ciD проводили у потомков двух гибридных скрещиваний (Рис. 5.), контролем для которых служила линия ciDC-S. Установлено, что в случае скрещивания ciDC-S x W-10 по сравнению с контролем у самок наблюдается незначительное уменьшение экспрессивности исследуемого признака, как на правом, так и на левом крыле. У самцов выявлены аналогичные изменения. При этом самцы - потомки скрещивания ciDC-S x W-10 характеризуются большей экспрессивностью признака ciD, нежели самки. Такой же результат был показан и для контроля линии ciDC-S, в которой большая экспрессивность ciD была характерна для самцов.

В скрещивании ciDC-S x Пирятин, по сравнению с контролем, экспрессивность ciD возросла у самцов и у самок на левом и правом крыле сравнительно одинаково. При этом у самок и самцов этот показатель находится примерно на одном уровне на обоих крыльях.

Во всех экспериментальных вариантах не выявлено асимметрии в проявлении признака на левом и правом крыле у особей обоих полов.


Рис. 5. Уровень экспрессивности признака ciD у особей линии ciDC-S гибридов и у линии


Соотношение особей с атрофией гонад и наличием неполной 4-й жилки

Так как доминантный алелль ciD в гомозиготе летален, соответственно, выжившие особи с неполной 4-й жилкой являются гетерозиготами. Тогда в скрещиваниях гетерозигот и особей дикого типа ожидается два фенотипа потомков: в первом случае особи будут обладать выраженной экспрессивностью гена ciD и, соответственно, прерванной жилкой крыла; во втором - особи без мутантного фенотипа.

Все особи (потомки каждого скрещивания отдельно, самки и самцы отдельно) были разделены на 4 фенотипических класса (Рис. 6.):

Полная жилка, нормальные гонады

Полная жилка, атрофия гонад

Прерванная жилка, нормальные гонады

Прерванная жилка, атрофия гонад.


а) Полная жилка, нормальные гонады b) Полная жилка. АГ c) Прерванная жилка, нормальные гонады d) Прерванная жилка, АГРис. 6. Соотношение особей с атрофией гонад и наличием неполной 4-й жилки


Во всех вариантах скрещиваний 1-й класс численно преобладал, межполовых различий при этом не наблюдалось. Наименьшим количеством особей характеризовался 4-й класс. При этом в линии ciDC-S самцов с данным фенотипом не обнаружено. В двух других классах количество особей варьирует. Так, в скрещиваниях ciDC-S x W-10 и ciDC-S x Пирятин наибольшее количество особей мужского пола было с третьим фенотипом (прерванная жилка, нормальные гонады), тогда как со вторым фенотипическим классом (полная жилка, атрофия гонад) в данных скрещиваниях количество самцов приближалось к нулю. И наоборот, количество особей мужского пола во втором классе преобладало в линии ciDC-S. Самок этой линии во втором фенотипическом классе не обнаружено.

В скрещивании ciDC-S x Пирятин наименьшее количество особей соответствовало второму фенотипическому классу. Количество самок и самцов было минимально по сравнению с третьим классом, но приблизительно равным таковому в 4-м классе (прерванная жилка, атрофия гонад).

Полученные данные свидетельствуют о том, что экспрессивность признака ciD не связана напрямую с уровнем атрофии гонад. В формировании экспрессивности большое значение имеет генотип особи, линия.

Так, при уровне АГ до 10% у гибридов ciDC-S x Пирятин, экспрессивность ciD достигает высокого уровня и у самцов порядка 64%, и у самок до 65 %.

Линия ciDC-S характеризуется высокой экспрессивностью ciD (до 60 %). Гибриды от скрещивания её с линией W-10, содержащей полноразмерный Р-элемент, характеризуются снижением экспрессивности исследуемого признака, как у самцов (до 45 %), так и у самок (до 30 %). При этом уровень атрофии гонад у гибридных самцов также снижается, а у самок значимых изменений не выявлено.

Возможно, ожидаемого корреляционного эффекта не выявлено, так как оба показателя экспрессия ciD и уровень АГ противоположно зависят от температуры. Так, степень выраженности гонадной атрофии в отношении Р-М системы наиболее значительна при 29°С у самок и 27°С у самцов, а при 24° С и ниже практически отсутствует[30]. Для Н-Е системы характерна наиболее сильная атрофия при 25°С и наименьшая при 29° С[28]. При более низких температурах АГ наблюдается в меньшей степени. Экспериментальные скрещивания и линии содержались при 23°-24°С. Такая температура не случайна. Экспрессивность ciD при данной температуре достигает максимального значения, и с увеличением температуры до 25-26°С видимых проявлений мутации наблюдаться не будет.

Тем не менее, результаты скрещивания ciDC-S с линией содержащей полноразмерный hobo-элемент подтверждают, литературные данные, свидетельствующие о том, что индукция перемещений МГЭ может изменять проявление соматических мутаций[31], в данном случае - увеличивать экспрессивность признака ciD. Экспрессивность ciD у особей линии ciDC-S варьировала в пределах 58-61 % для самцов и до 50 % у самок, тогда как у гибридов ciDC-S x Пирятин экспрессивность достигла уровня 65% для самок и самцов.

Таким образом, несмотря на разнонаправленные изменения экспрессивности признака ciD у гибридов разных дисгенных скрещиваний, результаты проведенного исследования косвенно подтверждают литературные данные, свидетельствующие о том, что индукция перемещения МГЭ в системах гибридного дисгенеза может иметь соматические эффекты. Но для получения более точных оценок необходимо провести несколько повторностей и проанализировать более многочисленные выборки.


ВЫВОДЫ


Анализ литературных данных показал, что Р- и hobo -элементы вызывают не только синдром гибридного дисгенеза, но и существуют единичные данные, прямо или косвенно свидетельствующие о соматической активности этих элементов.

В ходе выполнения дипломной работы была освоена методика работы с D. melanogaster. Проанализированы линии и гибриды на предмет наличия синдрома гибридного дисгенеза, оценен уровень экспрессивности признака ciD.

Установлено, что у гибридов ciDC-S x Пирятин при снижении уровня атрофии гонад наблюдается увеличение экспрессивности признака ciD., а у гибридов ciDC-S x W-10 - при уменьшении уровня атрофии гонад - снижение экспрессивности признака ciD.


СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Гинтер Е.К. Насекомые. В сб. «Методы биологии развития». // Ред. Детлаф Т.А. , «Наука»,- 1974, 272-281 с.

Голубовский М.Д. 1972. Некоторые общие характеристики организации генома и фенотипического проявления мутаций у дрозофилы. // Генетика - 1972.- Т. 8, № 5 - 143-157 с.

Антоненко О.В. Роль мобильных генетических элементов в отклике на селекцию по количественным признакам у Drosophila melanogaster. - Автореф. дис. канд. биол. наук. - Новосибирск ,- 2008. - 18 с.

Васильева Л.А. Изменение системы жилкования крыла Drosophila melanogaster под действием температурного шока и селекции // Журнал общей биологии. - 2005. - Т.66, №1. - С. 68-74.

ГОСТ 12.1.004-91 ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования. - Введ. 01.07.86; ГОСТ 12.1.004-91. ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования.- Чинний від 01.07.92.

ДНАОП - державний нормативний акт з охорони праці - 0.00 -4.12 - 99 «Типове положення про навчання з питань охорони праці»

ДСТ 12.0.003-74. ССБТ. Небезпечні і шкідливі виробничі фактории. Класифікація.

ДСТУ ISO 14004-97 Системи управління навколишнім середовищем. Загальні настанови щодо принципів управління, систем та засобів забезпечення. - Чинний від 18.08.97.

ЗАКОН УКРАЇНИ «Про державну систему біобезпеки при створенні, випробуванні, транспортуванні та використанні генетично модифікованих організмів». Документ 1103-16 <http://www.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=1103-16>, остання редакцiя вiд 09.02.2010 <http://zakon1.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=1103-16&c=1> на пiдставi 1804-17, чинний [http://zakon1.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=1103-16].

Закон України «Про охорону навколишнього середовища» від 25.06.91.

Охорона праці (Законодавство. Організація роботи): Навч. посіб. / За заг. ред. к.т.н., доц. І. П. Пістуна. - Львів: Тріада плюс, 2010.- 648 с.

ПОСТАНОВА КМУ від 6 травня 2000 р. N 770 «Про затвердження переліку наркотичних засобів, психотропних речовин і прекурсорів» - Документ 770-2000-п <http://www.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=770-2000-%EF>, остання редакцiя вiд 06.04.2011 <http://zakon1.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=770-2000-%EF&c=1> на пiдставi 327-2011-п <javascript:OpenDoc('327-2011-п')>; <http://zakon1.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=770-2000-%EF>

ПОСТАНОВА КМУвід 20 червня 1995 р. N 440 - «Про затвердження Порядку одержання дозволу на виробництво, зберігання, транспортування, використання, захоронення, знищення та утилізацію отруйних речовин, у тому числі продуктів біотехнології та інших біологічних агентів» - Документ 440-95-п <http://www.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=440-95-%EF>, редакцiя вiд 06.01.2010 на пiдставi 1391-2009-п <javascript:OpenDoc('1391-2009-п')>; <http://zakon1.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=440-95-%EF>

Правила устройства электроустановок. ПУЭ. Минэнерго СССР. - М.: Энергоатомиздат, 1987.

Про захист населення від інфекційних хвороб» - Документ 1645-14 <http://www.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=1645-14>, остання редакцiя вiд 11.06.2009 <http://zakon1.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=1645-14&c=1> на пiдставi 1254-17 <javascript:OpenDoc('1254-17')>, чинний; <http://zakon1.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=1645-14>

«Про забезпечення санітарного та епідемічного благополуччя населення» - Документ 4004-12 <http://www.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=4004-12>, поточна редакцiя вiд 12.03.2011 <http://zakon1.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=4004-12&c=1> на пiдставi 3038-17 <javascript:OpenDoc('3038-17')>, чинний (Редакція вiдбудеться 12.06.2011 на пiдставi 3038-17 <javascript:OpenDoc('3038-17')>) <http://zakon1.rada.gov.ua/cgi-bin/laws/main.cgi?nreg=4004-12>://flybase.org/reports/FBgn0004859.html

Атраментова Л. О., Утєвськая О. М. Статистичні методи в біологіі: Підручник. - Х.: ХНУ ім. В. Н. Каразіна, 2007. - 288 с.

Жимулев И.Ф; под ред. Е.С. Беляева, А.П. Акифьева. Общая и молекулярная генетика - 4-е изд. - Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2007. - 479 с.: ил.

Коваленко Л.В. hobo-элемент как фактор нестабильности генома Drosophila melanogaster в клетках генеративных и соматических тканей // Автореферат диссертации на соискание уч. степени к.б.н. -Российская академия наук. Сибирское отделение. Институт цитологии и генетики. - 2007. - 116 с.

Козерецкая И.А. Мобильные генетические элементы Drosophila melanogaster. Популяционно-генетический аспект.// Вісник Укр..тов-ва. генетиків і селекціонерів. - 2010.-Том 8, № 1.- 23 с.

Юшкова Е.А. Влияние хронического облучения в малых дозах на динамику изменчивости экспериментальных популяций Drosophila melanogaster, отличающихся по содержанию мобильных Р-элементов. // Автореферат диссертации на соискание уч.степени к.б.н. - Москва. - 2008. - 24 с.

Васильева Л.А., Захаров И.К. Селекция изменяет паттерн мобильных генетических элементов в геноме Drosophila melanogaster.// Вестник ВОГиС. - 2008. - Том 12, №3. - 412-424 с.

Вассерлауф И.Ф. Изменение организации хромосом в ядрах трофоцитов яичников Drosophila melanogaster при инбридинге и гибридном дисгенезе.// Вестник Томского государственного ун-та. - 2008. -. №316. - 178-186 с.

Голубовский М.Д. Нестабильность генов и мобильные элементы: к истории изучения и открытия.// Университет Калифорнии, Беркли, США; mdgolub@gmail.com. Историко-биологические исследования. - 2011. - Том 3, №4. - 60-76 с.

Буфф Е.М., Симонова О.Б. Участие мобильного элемента hobo в транспозицонных событиях в системе продлённой нестабильности у Drosophila melanogaster // Генетика. - 1992. - Т.28, №12. - 73-79 с.

Иващенко Н.И., Гришаева Т.М. Особенности индуцированного мутагенеза в системах гибридного дисгенеза у Drosophila melanogaster //Генетика.. - 2002. - Т. 38, №10. - 1351-1356 с.

Коваленко Л.В., Захаренко Л.П. Транспозиции hobo-элемента в соматических клетках Drosophila melanogaster // Генетика.. - 2006. - Т. 42., №2. - 177-184 с.

Юрченко Н.Н., Коваленко Л.В. Мобильные генетические элементы: нестабильность генов и геномов.// Вавиловский журнал генетики и селекции. - 2011.- Том 15, №2.- 261-266 с.

Кварец А.П., Мюссе Т.А. Динамика частоты гибридного дисгенеза у Drosophila melanogaster в контролируемых условиях хронического облученя.// Вестник Цитология и генетика.- 2010. - №3.- 21-26 с.

Голубовский М.Д. Век генетики: эволюция идей и понятий.// СПб.:Борей Арт.- 2000.81-96 с.

Артаманова В.С., Махров А.А. Генетические системы как регуляторы процес сов адаптации и видообразования (к системе микроэволюции).// Эволюционная теория: история и современность.- 2006. 381-396 с.

Шапошников М, Москалёв А. Половой диморфізм продолжитеьности жизни у Drosophila melanogaster // Вестник института биологии Коми НЦ УрО РАН.- 2006.- № 10(108)- 3-6 с.

Захаренко Л.П., Перепелкина М.П. Изменение распределения мобильных генетических элементов в геноме Drosophila melanogaster - причина или следствие селекции по количественным признакам? // Цитология.-2009.- Том 52, № 6 - 487-491 с.

Методические указания к практическим зпнятиям по большому практикуму. Генетический анализ Drosophila melanogaster.// Начальник: Каб. - Балк. Ун-т.- 2009. - 54 с.

Козак М.Ф. Дрозофила - модельный объект генетики. // Уч.-методическое пособие. - Астрахань: Издательский дом «Астраханский университет». - 2007.- 87 с.

Harald Eggert. Molecular Screening for P-Elrment in a Large Genomic Region of melanogaster Using Polimerase Chain Reaction Mediated by the Vectorette // Genetics. - 1998. - V. 149. - P. 1427-1433.

Ronsseray S <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Ronsseray%20S%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=6090865>. Hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster: influence of temperature on cytotype determination in the P-M system // Mol Gen Genet. -1984.-Р. 17-23.A. Drosophila I-R hybrid dysgenesis is associated with catastrophic meiosis and abnormal zygote formation // Journal of Cell Science.- 2000.-Р. 43-54.P. van Rij1 and Eugene Berezikov. Small RNAs and the control of transposons and viruses in Drosophila. // Elsevier Ltd. All rights reserved .-2009. - Р. 163-170.J. Miller Pierre Capy. Mobile Genetic Elements. // From: Methods in Molecular Biology. - 2006.- Р. 32-45.S., M. BERLOCO, L. FANT, P. DIMITRI, S.BONACCORSI, E. MARCHETTI, R. CAIZZI. Transposable elements are stable structural components of Drosophila melanogaster heterochromatin. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA .- 1995. - Р. 3804-3808.

Orenic TV <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Orenic%20TV%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=2166702>, Slusarski DC <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Slusarski%20DC%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=2166702>, Kroll KL <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kroll%20KL%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=2166702>, Holmgren RA <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Holmgren%20RA%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=2166702>. Cloning and characterization of the segment polarity gene cubitus interruptus Dominant of Drosophila. // Genes Dev. <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2166702> - 1990.- Р. 1053-67.

Orenic T <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Orenic%20T%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=3666312>, Chidsey J <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Chidsey%20J%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=3666312>, Holmgren R <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Holmgren%20R%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=3666312>. Cell and cubitus interruptus dominant: two segment polarity genes on the fourth chromosome in Drosophila. // Dev Biol. <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3666312> - 1987.- Nov;124(1).- Р. 50-65.Hepker, Qun-Tian Wang, Cynthia K. Motzny, Robert Holmgren and Teresa Vales Orenic. Drosophila cubitus interruptus forms a negative feedback loop with patched and regulates expression of Hedgehog target genes. // Development . -1997. - Р. 549-558.J. Clock Mutants of Drosophila melanogaster.// Dev Biol.- 1971. -Vol. 68, No. 9. - Р. 2112-2116.

Білоусов О.О., Козерецька І.А.. Поширення мобільного елементу hobo в природних популяціях D. melanogaster України // Дрозофіла в експериментальній генетиці та біології: сб. научн. статей. - Х.: ХНУ, 2008. - C. 76-78 с.


Теги: Анализ соматических проявлений гибридного дисгенеза у Drosophila melanogaster (на модели признака cubitus interruptus Dominant)  Курсовая работа (теория)  Биология
Просмотров: 5626
Найти в Wikkipedia статьи с фразой: Анализ соматических проявлений гибридного дисгенеза у Drosophila melanogaster (на модели признака cubitus interruptus Dominant)
Назад